《Hybrid pappír/PDMS örflæðandi tæki samþætt með RNA útdrætti og raðbrigða fjölliðun til að greina norovirus í matvælum tjá
Norovirus (Hunov) tilheyrir Caliciviridae fjölskyldunni og er fyrst og fremst send með menguðum mat. Það er leiðandi orsök bráðrar meltingarbólgu.
Veirusjúkdómarmiðstöð Lady Davis -stofnunarinnar við McGill háskólann í Kanada hefur birt sameiginlega rannsóknir á tengdum greiningarrannsókn. Rannsóknarteymið þróaði origami-undirstaða örflæðandi tæki og notaði músa norovirus 1 (Mnv -1) til að prófa tilraunir. Tækið frásogar RNA með pappírsstrimli, magnar RNA með því að nota mira multi-ensím isothermal hröð kjarnsýru magnunartækni og framkvæmir hliðarflæðisgreiningu á pappírsröndinni. Allt uppgötvunarferlið og niðurstöðurnar eru sýndar, með prófinu lokið innan 35 mínútna og ná 100% sértækni og greiningarmörkum 200 pfu/ml. Þetta tæki sýnir verulegan möguleika til að greina matvælaveirur í landbúnaðarafurðum, sérstaklega í afskekktum og auðlindatakmarkuðu umhverfi.
Tilraunaaðferð
Cellulose pappírsrönd frásogast Mnv -1 RNA, sem síðan var sleppt í mira hvarfefnið. RNA var fyrst umritað í viðbótar DNA (cDNA) og magnað síðan í tvístrengið DNA (dsDNA). Í kjölfarið eru rannsakar sérstaklega bundnir við markröðina. Eftir að tetrahýdrófúran (THF) leifin var klofin með endonuclease IV, var strengurinn sem eftir var framlengdur með fjölliðu til að framleiða fullkomið amplicon. Amplicon var tekin og sjón sem litabreyting á T-línunni.
(Skýringarmynd af tilraunareglu)
Þróunarárangur
(Skematísk skýringarmynd af pappír/PDMS örflæðandi tæki)
Rannsóknarteymið þróaði fellanlegan pappír/PDMS örflæðandi tæki sem samþættir margar aðgerðir, þar með talið útdrátt kjarnsýru, isothermal kjarnsýru mögnun og sjónræn uppgötvun. Þetta tæki samþættir óaðfinnanlega allt ferlið, frá undirbúningi sýnishorns til endapunkta uppgötvunar Mnv -1.
Örflæðibúnaðinn lýkur uppgötvuninni innan 35 mínútna, með greiningarmörkum 200 pfu/ml. Kostnaður við hvert örflæðandi tæki er reiknaður út 6,76 $, sem gerir það að hagkvæmustu aðferðinni meðal allra þekktra uppgötvunaraðferða sem rannsóknarteymið notar.
Tilraunamikil
Rannsóknarteymið lagði enn fremur metið frammistöðu þessa örflæðisbúnaðar til að greina MNV -1 í salat og hindberjum. Þeir kynntu gróf Mnv -1 RNA útdrætti í ferskum landbúnaðarsýnum og útrýma þörfinni fyrir flókna RNA útdrátt og hreinsunarskref. Tækið greindi 170 pfu/g í salat og 230 pfu/g í hindberjum.
(Næmi Mnv -1 uppgötvun í salat og hindberjum með því að nota örflæðandi tækið)
Hefðbundnar sameindaaðferðir til að greina vírusa í matvælum, svo sem PCR og QPCR, krefjast mikils hreinleika vírusa, sem gerir ferlið við vírusfrumun, styrk og hreinsun frá matvælafatinu flókið. Að auki þurfa hefðbundnar aðferðir flókna, fyrirferðarmikla og dýran búnað, sem gerir þær óhæfar til notkunar í takmarkaðri umhverfi auðlinda.
Þetta tæki hefur verulegt gildi til að greina Hunov og aðra matvæla í matvælum innan matvælakeðjunnar.
Upplýsingar um grein
Tímarit: Applied and Environmental Microbiology
Titill greinar: Hybrid Paper/PDMS örflæðandi tæki samþætt með RNA útdrætti og raðbrigða fjölliðun til að greina norovirus í matvælum
Áhrif þáttur: 3.9
Rannsóknarteymi: Veirusjúkdómarmiðstöð, Lady Davis Institute, McGill háskólinn