Bráð öndunarsýking eru algeng öndunarsjúkdómar hjá börnum, oft af völdum vírusa. Öndunarfærasjúkdómsveiran (RSV) og adenovirus í öndunarfærum (ADV) eru tveir algengir sýkla sem valda bráðum öndunarfærasýkingum hjá börnum. Væg tilfelli geta valdið kvef einkennum eins og hósta og nefrennsli, en alvarleg tilfelli geta valdið alvarlegum fylgikvillum eins og lungnabólgu og miðeyrnabólgu. Samkvæmt tilmælum Alþjóðaheilbrigðismálastofnunarinnar þarf að greina sýkla að vera hröð, nákvæm, viðkvæm og sértæk og ætti ekki að treysta á sérhæfða tæknimenn eða stór hljóðfæri. Þess vegna er sérstaklega mikilvægt að þróa uppgötvunaraðferð fyrir RSV og ADV sem geta uppfyllt ofangreindar uppgötvunarkröfur.
Rannsóknarhópur forstöðumanns Ma Dongli við Institute of Pediatrics of Shenzhen Children's Hospital birti grein „Multiplex Resombinase Polymerase Amplification Assay ásamt CRISPR/ CAS12A til að greina öndunarfærasýkingarveiru og öndunar adenovirus“ í tímaritinu „Scientific Reports“, með áhrifaþátt um 4.6.
Yfirlit yfir rannsóknar
Multi-ensím isothermal hröð kjarnsýru magnunartækni Mira er sameinuð CRISPR/CAS uppgötvunarkerfinu. Með því að hanna mira grunnur og CRISPR RNA (CRRNA), framkvæma samanburð á mörgum röð, hámarka viðbragðsskilyrði og nota tölulegar uppgötvunartæki til að sannreyna næmi og sértæki.
Og með því að nota QPCR niðurstöður sem samanburðarstjórnun var samkvæmni niðurstaðna niðurstaðna af 160 klínískum hálsþurrku sýni rannsökuð.
Niðurstöður tilrauna
1. næmi og sértæki Mira-CRISPR/CAS12A uppgötvunaraðferðar
Í uppgötvun MirA aðferðarinnar er RSV-F1/R1 grunnparið notað til að magna kjarnsýrur úr hálsþurrkusýni af RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, FLUB, HMPV, Flua eða RSV/ADV samhliða sjúklingum. Að undanskildum RSV og ADV, sem höfðu magnað hljómsveitir, voru aðrar niðurstöður neikvæðar, sem bentu til þess að valdir Mira-grunnarnir hafi ekki snúist við hina átta sýkla sem voru prófaðir og voru vel varðveittir.
Í kjölfarið voru RSV og ADV raðbrigða plasmíðin þynnt 10 tíma með sæfðu vatni og greiningarmörkin fyrir RSV og ADV voru bæði 106Afrit/ml.
(1-10: Hálsþurrkur frá sjúklingum með RSV, RSV/ADV samsýkingu og önnur sýkla sýni í öndun
2. Berðu saman við qPCR
Í samanburði við QPCR aðferðina eru uppgötvunarmörk RSV og ADV bæði 103 eintök/ml
(Næmi QPCR uppgötvunar RSV og ADV)
Mira-CRISPR aðferðin hentar betur fyrir grasrótarannsóknarstofur, með stuttum uppgötvunartíma, einföldum aðgerðum og engin þörf fyrir stórfellda QPCR tæki til að ljúka tilraunaaðgerðum.
3. Samanburður á klínískum sýnum
Hálsþurrkur sýni var safnað frá 160 börnum með bráða öndunarfærasýkingar. Á sama tíma voru Mira-CRISPR aðferð og QPCR aðferð notuð til uppgötvunar og niðurstöðurnar voru bornar saman við niðurstöður klínískra rannsókna.
Í samanburði við QPCR aðferðina var næmi mira-CRISPR aðferðarinnar fyrir RSV og ADV 98,1% og 91,4% í sömu röð, og sértækni greiningarinnar var 1 0 0%. Kappa gildi er meira en 0,95, sem gefur til kynna mikla samkvæmni.
Mira-CRISPR aðferðin hefur kostina við skjótan, viðkvæma og sértæka uppgötvun RSV og Adv. Það getur greint veirusýkingar tafarlaust og nákvæmlega og hentar betur til notkunar á svæðum með af skornum skammti.