Á sviði sameindagreiningar hefur pólýmerasa keðjuverkun (PCR) lengi verið álitin gulls ígildi fyrir kjarnsýrugreiningu. Undanfarin ár hefur jafnhita mögnunartækni, táknuð með recombinase polymerase amplification (RPA), vakið vaxandi athygli vegna hraða, einfaldleika og hæfis til-prófunar á staðnum.
Þrátt fyrir að bæði PCR og RPA séu kjarnsýrumögnunaraðferðir, þá eru þær verulega mismunandi hvað varðar vinnureglur, búnaðarkröfur og notkunarsviðsmyndir, sem gerir hverja tækni hentug fyrir mismunandi greiningarþarfir.
1. Kjarnareglur: Varmahjólreiðar á móti stöðugri-hitamögnun
PCR er lífefnafræðilegt ferli sem getur magnað eina DNA sameind í milljónir eintaka á stuttum tíma. Hvarfið byggir á endurteknum hitauppstreymi og samanstendur af þremur meginþrepum:
1.Denaturation (90–95 gráður) – Tvöfaldur-strengja DNA er aðskilið í staka þræði.
2. Glæðing (55–65 gráður) – Grunnur bindast markröðunum.
3. Framlenging (72 gráður) - DNA pólýmerasi myndar nýja DNA þræði.
Í gegnum þessar-hitastýrðu lotur er mark-DNA magnað veldisvísis með mikilli nákvæmni. Hins vegar, PCR krefst flókinna hitauppstreymistækja og tekur venjulega 1–2 klukkustundir að klára.
Aftur á móti starfar RPA við stöðugt hitastig 37–42 gráður, sem gerir hraða kjarnsýrumögnun kleift án hitauppstreymis. Tæknin byggir á samræmdri virkni recombinasapróteina, einstrengs- DNA-bindandi próteina og strengja-tilfærandi DNA pólýmerasa til að ná fram mjög sértækri markmögnun við jafnhitaskilyrði.
DNA-pólýmerasinn sem notaður er í RPA hefur þræði tilfærsluvirkni en skortir 5'→3' exonukleasavirkni. Meðan á mögnun stendur teygjast ytri primers fram eftir sniðmátstrengnum. Þegar þeir lenda í tvöföldu-þráðum svæðum sem eru mynduð úr innri frumurum, getur pólýmerasinn ekki brotið niður strenginn og færir hann í staðinn og myndar nýjar mögnunarafurðir.
Öllu hvarfinu er lokið við stöðugt hitastig, sem útilokar þörfina á flóknum tækjabúnaði og gerir raunhæfa-punkta-umönnunar-tengt prófun kleift. Með því að innlima öfugt umrit er einnig hægt að beita RPA við RNA markgreiningu.
Hægt er að greina mögnunarniðurstöður með því að nota mörg útlestrarsnið, þar á meðal endapunktagreiningu, rauntíma flúrljómunarvöktun, hliðarflæðismælingar, og hægt er að samþætta þær frekar við CRISPR-Cas kerfi, örflæði eða næstu-kynslóð raðgreiningu (NGS) fyrir háþróaða greiningarþróun.
Umsóknarsviðsmyndir: Nákvæmni rannsóknarstofu vs.-hraðprófun á staðnum
PCR er orðin ein verðmætasta sameindagreiningartæknin og er enn gulls ígildi fyrir kjarnsýruprófanir.
Þökk sé mikilli nákvæmni,-kostnaðarhagkvæmni og sveigjanleika er PCR mikið notað í klínískri greiningu, miðlægum rannsóknarstofum, rannsóknastofnunum og stórum-skimunaráætlunum, þar sem innviðir og þjálfað starfsfólk er aðgengilegt.
RPA býður aftur á móti upp á skýra kosti í hraðri-greiningu á vefsvæði. Með mögnun lokið á allt að 20 mínútum, lágmarkskröfur um búnað og einfalda aðgerð, hentar RPA fullkomlega fyrir.
- Heilsugæsla og neyðaraðstæður
- Tollgæsla og landamæraeftirlit
- Vettvangsskimun dýra- og plöntusjúkdóma
- Umhverfis- og matvælaöryggisprófanir
Þegar það er sameinað með flytjanlegum tækjum og hliðarflæðisstrimlum, gerir RPA hraðar og áreiðanlegar sameindaprófanir utan hefðbundinna rannsóknarstofa.
MIRA (Multienzyme Isothermal Rapid Amplification)er eigin jafnhita mögnunartækni Amp Future. Það tilheyrir sömu tæknilegu fjölskyldu og RPA og er innblásið af náttúrulegum DNA endurröðunar- og viðgerðaraðferðum, sem notar mörg virk ensím til að ná hraðri kjarnsýrumögnun við stöðugt hitastig.
MIRA notar samræmt kerfi fimm lykilensíma, þar á meðal helicasa, recombinasa, einþátta DNA-bindandi prótein og DNA fjölliða til að gera:
- Breitt vinnsluhitasvið: 25 gráður -45 gráður
- Hröð mögnun: niðurstöður innan 20 mínútna
- Mikið næmi og sérhæfni
- Aukið öryggi og minni mengunarhætta
MIRA er kjarnsýrumögnunartækni sem er sérstaklega hönnuð fyrir sannprófanir á-stað og-stað-stað.
Amp Future byggir á MIRA vettvangnum og hefur þróað alhliða vöruúrval fyrir hraðsameinda POCT, þar á meðal:
Hröð kjarnsýrulosunarefni:
Magnanleg kjarnsýra fæst innan 5 mínútna við stofuhita; lítil hömlun, sem gerir ráð fyrir fullri hleðslu á sýni allt að 50 μL; flutningur og geymsla við stofuhita, engin ljósvörn nauðsynleg.
Jafnhitakjarnsýrumögnunarhvarfefni:
Mögnun lokið á 5-20 mínútum, hröð og skilvirk; ýmis hvarfefnaform (frystþurrkað duft, frostþurrkað örkúlur osfrv.); ýmsar aðferðir til að kynna niðurstöður (rafmagn, flúrljómun, prófunarstrimlar).
Miniaturized flytjanlegur tæki:
Stafrænir jafnhitaskynjarar, -vasastærð prófunarverkfæri, auðvelt að halda í annarri hendi, búin rafmagnsbanka, losa þig undan þvingunum rannsóknarstofunnar og koma með nákvæmar kjarnsýruprófanir á sviði.
Einkar/margar prófunarræmur:
Bjartsýni byggt á MIRA aðferðafræðinni fyrir betri eindrægni; ásamt MIRA tækni sem leggur áherslu á þægindi.
Alveg sjálfvirkur kjarnsýrumögnunargreiningartæki:
Krefst aðeins einnar sýnishleðsluaðgerðar fyrir fullkomlega sjálfvirka uppgötvun; greiningarmörk niður í eitt eintak; jafnhitamögnun og sjálfvirk lokun draga úr hættu á mengun.
Hraðprófunarpakki á-síðunni:
Á-staðprófun-, hvenær sem er, hvar sem er, allt í einum pakka; lýkur prófun á 30 mínútum, nákvæm og viðkvæm.
Fyrir frekari upplýsingar um vörur eða lausnir skaltu ekki hika við að hafa samband við okkur.